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基因过表达的原理 步骤 应用?(细胞过表达中质粒如何构建及转染?)

作者:佚名      发布时间:2021-09-14      浏览量:15406
基因过表达的原理 步骤 应用?顾名思义,基因过表达是将某个基因大量表达的过程。这个过程可以是在基因原本所在的细胞中,也可以是在其它表达系统中进行。其基本原理是通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件,使基因可以在人为控制的条件下实现大量

基因过表达的原理 步骤 应用?


顾名思义,基因过表达是将某个基因大量表达的过程。这个过程可以是在基因原本所在的细胞中,也可以是在其它表达系统中进行。其基本原理是通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件,使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译,从而实现基因产物的过表达。
现在有很多成熟的表达系统用于基因过表达,常用的包括:大肠杆菌表达系统,酵母表达系统,昆虫表达系统,哺乳动物细胞表达系统和体外翻译系统(无细胞体系)。虽然这些系统各不相同,但过表达的基本步骤相似。
1. 构建克隆。将目的基因连接在特定的载体上,载体种类

细胞过表达中质粒如何构建及转染?


跟一般的片段插进质粒构建一样啊 只是过表达的话扩增出来的片段必须包含该基因完整的CDS序列 然后插入位点要在质粒的promoter后面 序列不能有突变 转染也和别的一样 用Lipo啥的

如果293t本身不表达这个蛋白的话,最大的可能是一抗质量不过关
你可以做一下免疫印迹看看。免疫组化假阳性多正常(非特异性吸附)。
免疫印迹western blotting用分子量大小来判断,很难出假的。


质粒构建、提取详细步骤?


构建载体就是把目标DNA、载体、DNA连接酶、酶的buffer放到一起,然后4度连接过夜就行了。上面各个东西的用量,你可以参考连接酶的说明书。如果你是想连T载体的话,就可以直接拿PCR产物和载体连,如果是想做表达载体的话,你还要把目标DNA和载体进行酶切回收后,才能连。
质粒提取的方法一般用碱提法,去网上搜下,有很多的。或者买试剂盒提(试剂盒大部分也是碱提法的)。

实验一
apali (178)
p(bla) alpha
质粒dna的提取、 质粒dna的提取、酶切 dna的提取 及